高中生物：基因工程與蛋白質(zhì)工程
2019-01-22 19:29:04三好網(wǎng)
一、基因工程
基因工程是指按照人們的愿望，進行嚴格的設計，通過體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因技術，賦予生物以新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品�；蚬こ淌窃贒NA分子水平上進行設計和施工的，又叫做DNA重組技術。
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1.“分子手術刀”——限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶）
�。�1）來源：主要是從原核生物中分離純化出來的。
（2）功能：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈 中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，因此具有專一性。
（3）結(jié)果：經(jīng)限制酶切割產(chǎn)生的DNA片段末端通常有兩種形式：黏性末端和平末端。
2.“分子縫合針”——DNA連接酶
�。�1）兩種DNA連接酶（E？coliDNA連接酶和T4-DNA連接酶）的比較：
①相同點：都縫合磷酸二酯鍵。
�、趨^(qū)別：E？coliDNA連接酶來源于T4噬菌體，只能將雙鏈DNA片段互補的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來；而T4DNA連接酶能縫合兩種末端，但連接平末端的之間的效率較低。
（2）與DNA聚合酶作用的異同： DNA聚合酶只能將單個核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯鍵。DNA連接酶是連接兩個DNA片段的末端，形成磷酸二酯鍵。
3.“分子運輸車”——載體
�。�1）載體具備的條件：①能在受體細胞中復制并穩(wěn)定保存。
�、诰哂幸恢炼鄠�限制酶切點，供外源DNA片段插入。
�、劬哂袠擞浕颍┲亟MDNA的鑒定和選擇。
（2）最常用的載體是--質(zhì)粒，它是一種裸露的、結(jié)構簡單的、獨立于細菌染色體之外，并具有自我復制能力的雙鏈環(huán)狀DNA分子。
�。�3）其它載體：噬菌體的衍生物、動植物病毒
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第一步：目的基因的獲取
1.目的基因是指：編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構基因。
2.原核基因采取直接分離獲得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反轉(zhuǎn)錄法和化學合成法。
3.PCR技術擴增目的基因
�。�1）原理：DNA雙鏈復制
�。�2）過程：第一步：加熱至90～95 ℃DNA解鏈；第二步：冷卻到55～60 ℃，引物結(jié)合到互補DNA鏈；第三步：加熱至70～75 ℃，熱穩(wěn)定DNA聚合酶從引物起始互補鏈的合成。
第二步：基因表達載體的構建
1.目的：使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用。
2.組成：目的基因＋啟動子＋終止子＋標記基因
�。�1）啟動子：是一段有特殊結(jié)構的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得所需的蛋白質(zhì)。
�。�2）終止子：也是一段有特殊結(jié)構的DNA片段，位于基因的尾端。
�。�3）標記基因的作用：鑒定受體細胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細胞篩選出來。常用的標記基因是抗生素基因。
第三步：將目的基因?qū)胧荏w細胞
1.轉(zhuǎn)化：目的基因進入受體細胞內(nèi)，并且在受體細胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達的過程。
2.常用的轉(zhuǎn)化方法：
將目的基因?qū)胫参锛毎翰捎米疃嗟姆椒ㄊ寝r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，其次還有基因槍法和花粉管通道法等。
將目的基因?qū)雱游锛毎鹤畛Ｓ玫姆椒ㄊ秋@微注射技術。此方法的受體細胞多是受精卵。
將目的基因?qū)胛⑸锛毎涸松镒鳛槭荏w細胞的原因是繁殖快、多為單細胞、遺傳物質(zhì)相對較少，最常用的原核細胞是大腸桿菌，其轉(zhuǎn)化方法是：先用 Ca2+處理細胞，使其成為感受態(tài)細胞，再將重組表達載體DNA分子溶于緩沖液中與感受態(tài)細胞混合，在一定的溫度下促進感受態(tài)細胞吸收DNA分子，完成轉(zhuǎn)化過程。
3.重組細胞導入受體細胞后，篩選含有基因表達載體受體細胞的依據(jù)是標記基因是否表達。
第四步：目的基因的檢測和表達
1.首先要檢測轉(zhuǎn)基因生物的染色體DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子雜交技術。
2.其次還要檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，方法是采用用標記的目的基因作探針與 mRNA雜交。
3.最后檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)，方法是從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，用相應的抗體進行抗原－抗體雜交。
4.有時還需進行個體生物學水平的鑒定。如轉(zhuǎn)基因抗蟲植物是否出現(xiàn)抗蟲性狀。
（三）基因工程的應用
1.植物基因工程：抗蟲、抗病、抗逆轉(zhuǎn)基因植物，利用轉(zhuǎn)基因改良植物的品質(zhì)。
2.動物基因工程：提高動物生長速度、改善畜產(chǎn)品品質(zhì)、用轉(zhuǎn)基因動物生產(chǎn)藥物。
3.基因治療：把正常的外源基因?qū)氩∪梭w內(nèi)，使該基因表達產(chǎn)物發(fā)揮作用。
二、蛋白質(zhì)工程的概念
蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構規(guī)律及其生物功能的關系作為基礎，通過基因修飾或基因合成，對現(xiàn)有蛋白質(zhì)進行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿足人類的生產(chǎn)和生活的需求。（基因工程在原則上只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì)）
1.蛋白質(zhì)工程的基本原理：它可以根據(jù)人的需求來設計蛋白質(zhì)的結(jié)構，又稱為第二代的基因工程。
2.基本途徑：從預期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)，設計預期的蛋白質(zhì)結(jié)構，推測應有的氨基酸序列，找到相對應的脫氧核苷酸序列（基因）是蛋白質(zhì)工程特有的途徑；以下按照基因工程的一般步驟進行。（注意：目的基因只能用人工合成的方法）
3.設計中的困難：如何推測非編碼區(qū)以及內(nèi)含子的脫氧核苷酸序列。
